目的:检测泛素特异性蛋白酶18(USP18)在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性(细胞增殖、细胞克隆、细胞周期、细胞凋亡)的影响。方法2013年7月—2014年7月选取5种肝癌细胞株(Hep G2、Hep G2.2.15、Hep 3B、Huh -7、SMMC -7721),采用实时荧光定量 PCR(RT - PCR)和 Western blotting 法分别检测 USP18 mRNA 和USP18表达水平,选择表达活性最强的细胞株进行小干扰 RNA(siRNA)转染。利用 LipofectamineTM 2000法将 USP18 siRNA 转染肝癌细胞,分为正常组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组。采用RT - PCR和 Western blotting法检测干扰效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验检测克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V - FITC/ PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果5种肝癌细胞株中 USP18 mRNA 和 USP18表达水平比较,差异有统计学意义(P <0.05),其中Hep 3B肝癌细胞株中 USP18 mRNA 和 USP18表达水平高于其他4种肝癌细胞株(P <0.05),故选取Hep 3B肝癌细胞株进行后续实验。Hep 3B肝癌细胞株转染 USP18 siRNA 后48 h,转染效率达(91.00±5.67)%。5组干扰效率比较,差异有统计学意义(P <0.05);其中 siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组干扰效
作者:颜伟;刘安文;蔡婧;汪弋汀;曾小莉;陈雅洁;熊乐;国畅阔
来源:中国全科医学 2015 年 33期