目的 构建稳定过表达泛素特异性蛋白酶53(USP53)的食管癌Eca109细胞株.方法 以GE公司购买的含USP53全长序列的质粒作为模板,使用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增出USP53全长基因,将构建好的USP53慢病毒质粒和包装质粒共转染293T细胞获得浓缩慢病毒颗粒,再将慢病毒颗粒感染Eca109细胞,最后通过含有嘌呤霉素的培养基筛选稳定转染细胞株.结果 过表达细胞株中的USP53的mRNA表达量(45.070±0.942)分别与对照组(1.091±0.075)及正常组(1.000±0.023)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),Westem blot实验显示过表达细胞株中标签蛋白HA明显高表达,对照组及正常组未见标签蛋白表达.结论 成功构建人去泛素化酶USP53稳定高表达细胞株.
作者：田黎民；吴春林；周奇芬；范大铬；蔡素琴；杨钰斌
来源：中华实验外科杂志 2019 年 36卷 4期
