目的构建弓形虫RH株表面抗原P35基因重组表达质粒P35/pGEX-2T,并在大肠杆菌JM109中进行表达、纯化及鉴定. 方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从弓形虫cDNA文库中扩增出编码P35抗原的基因片段,克隆入表达载体pGEX-2T,并在大肠杆菌JM109中融合表达,经GSTraPTM亲和层析柱纯化出P35重组融合蛋白,以SDS-PAGE电泳鉴定纯度、Western-blot鉴定抗原性. 结果成功构建了重组表达质粒P35/pCEX-2T,融合表达产物的分子质量约为70kDa;该蛋白抗原能为谷胱甘肽S转移酶(GST)单克隆抗体及弓形虫感染的兔血清所识别. 结论弓形虫表面抗原P35在大肠杆菌中有效表达,纯化蛋白有良好的免疫活性.
作者：林敏；吴少庭；张仁利；高世同
来源：中国热带医学 2004 年 4卷 3期
