目的 构建分泌表达融合蛋白CFP10-ESAT6的重组卡介苗.方法 采用基因拼接(Gene SOEing)法,体外扩增结核杆菌CFP10-ESAT6融合基因,插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG3000,构建重组穿梭表达质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,用电穿孔法将pBCG3000-CFP10-ESAT6质粒转化BCG细胞,得到重组卡介苗,热诱导表达CFP10-ESAT6融合蛋白,SDS-PAGE电泳观察CFP10-ESAT6融合蛋白的表达,Western blot鉴定其生物活性.结果 经PCR、酶切及测序鉴定,证实成功构建重组质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,经热诱导表达出约22kDa的CFP10-ESAT6蛋白.可分别被鼠抗ESAT6血清、鼠抗CFP10血清识别.结论 分泌性表达融合蛋白CFP10-ESAT6的重组卡介苗构建成功.
作者：张红宇；李晓恒；范兴；罗道泉；吴少庭
来源：中国热带医学 2009 年 9卷 5期
