目的 构建分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗.方法 PCR扩增结核分枝杆菌热休克蛋白60(hsp60)的调控序列和合成T4转录终止序列,分别定向克隆入pBCG2000载体的多克隆位点的上下游,得到E.coli-Mycobacterium穿梭载体质粒pBCG3000.PCR分别扩增出结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B的全编码序列及ESAT-6基因,然后将两基因融合插入pBCG3000载体的hsp60启动子下游得到pBCG3000-85B-ESAT-6分泌性表达质粒.用电穿孔法将pBCG3000-85B-ESAT-6质粒转化BCG细胞,得到重组卡介苗.重组卡介苗经热诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定融合蛋白85B-ESAT-6的表达及其免疫学活性.结果 通过PCR、酶切以及测序鉴定,pBCG3000-85B-ESAT-6表达质粒构建完全正确,SDS-PAGE电泳未能直接观察到表达的融合蛋白条带,用ESAT-6蛋白的多抗血清通过Western blotting证实了该蛋白主要分泌性表达于胞外并具有免疫学活性.结论 分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗构建成功.
作者：刘洪波；吴少庭；蔡昌学；甘燕；秦莉
来源：热带医学杂志 2006 年 6卷 10期
