目的 建立防止产物污染的UDPE(UDG-Duplex PCR-EIA)技术，用于检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌。方法选择类鼻疽伯克霍尔德氏菌FUR(Ferric Uptake Regulator)基因为靶序列，设计两对引物进行PCR扩增，用UDG(尿嘧啶糖基化酶)防止PCR产物污染，并用微孔板杂交-酶联显色检测扩增的PCR产物片段；用不同的模板考察方法的特异性和灵敏度。结果该检测系统可以特异性地检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌；对于纯DNA模板，检测灵敏度可以达到10fg/μl；对于系列稀释菌液提取的模板，灵敏度可达0.1个菌/μl；对于模拟污水标本、模拟组织标本和模拟土壤标本的检测灵敏度分别为10个菌/μl，100个菌/μl和100个菌/μl；检测系统可以防止109个PCR产物分子的污染；检测系统可以在37℃下稳定保存7d。结论本研究建立了稳定的，防止产物污染，灵敏度和特异性均较理想的类鼻疽伯克霍尔德氏茵UDPE检测系统。
作者：宋亚军；王津；张敏丽；郭兆彪；杨瑞馥
来源：中国人兽共患病杂志 2001 年 17卷 2期
