目的为结核病新型疫苗研究提供靶基因和靶抗原.方法采用PCR扩增的方法获得结核杆菌两种免疫保护性抗原Ag85A及ESAT-6的基因,将其定向克隆入真核及原核穿梭表达型载体pBK-CMV构建含嵌合目的基因的重组质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western-blotting对表达蛋白进行初步分析.结果 1)从结核杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Ag85A及ESAT-6基因.2)成功构建了结核杆菌Ag85A及ESAT-6双价抗原融合表达质粒pBK-85A-E6.3)重组质粒pBK-85A-E6经IPTG诱导后能在大肠杆菌中稳定表达38kDa的融合蛋白.结论成功构建了结核杆菌Ag85A及ESAT-6双价抗原融合表达载体,并在大肠杆菌中实现了稳定表达,为进一步研究其在结核病基因工程疫苗研制中的应用奠定了基础.
作者：谢勇恩；鲍朗；陈炜；李学敏；于向华
来源：中国人兽共患病杂志 2002 年 18卷 2期
