目的克隆查菲埃立克体120kDa膜表面抗原蛋白基因,获得纯化的重组蛋白.方法根据查菲埃立克体(91HE17)120kDa抗原蛋白基因序列设计特异性引物,PCR扩增查菲埃立克体120kDa抗原蛋白的基因片段;用限制性内切酶酶切PCR扩增产物后与pUC18载体相连接,经酶切和序列分析证实后,将目标片段定向插入原核表达载体pProEX HTB中构建pProEX HTB/p120重组质粒;将重组质粒转化E.coli DH5α,并使转化子在IPTG的诱导下进行蛋白质表达;运用亲和层析和电洗脱法对重组蛋白进行纯化.结果克隆到一大小为1080bp的查菲埃立克体120kDa抗原蛋白的基因片段,用该基因与表达质粒连接,成功构建了重组表达质粒;SDS-PAGE分析显示:在IPTG诱导下,重组表达质粒转化的大肠杆菌产生一分子量为47kDa的目标蛋白,免疫印迹证明该重组蛋白能与查菲埃立克体免疫血清发生反应.用纯化的重组蛋白作免疫斑点分析,76份被检血清中有2份为可疑阳性,但经IFA复核为阴性.结论查菲埃立克体120kDa重组抗原蛋白具有免疫反应活性,为以重组蛋白为基础的人单核细胞埃立克体病的血清学诊断试剂盒制备和疫苗的研制奠定了基础.
作者：严延生；陈亮；Xuejie Yu；陈前进
来源：中国人兽共患病杂志 2004 年 20卷 1期
