葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定-临床诊疗知识库

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作者：

孙爱华；王邵浙新；王阮萍；毛亚飞；严杰

来源：

中国人兽共患病杂志 2004 年 20卷 4期

标签：

Staphylococcal enterotoxin A SEA gene/cloning eukaryotic expression system/construction recombinant protein/expression

目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况.方法采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565菌株中扩增全长SEA,目的扩增片段T-A克隆后测序.经核酸内切酶酶切重组质粒pUCm-T-SEA获得的pUCm-T-SEA基因片段与真核表达载体pPIC9K连接.采用电融合法将重组真核载体pPIC9K-SEA转化入P.pastoris GS115株,构建成真核表达系统pPIC9K-SEA-P.pastorisGS115.采用含G418抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定pPIC9K-SEA-P.pastorisGS115.0.5

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