目的 构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)小囊膜蛋白(E蛋白)的DNA疫苗pVAC-E,观察其在小鼠中诱导的免疫应答.方法 采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒E蛋白的基因片段,克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-E重组质粒.通过脂质体介导瞬时转染非洲绿猴肾(Vero)细胞,Western-blot鉴定E蛋白在细胞中的表达.以基因枪方式免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体,MTT法测定淋巴细胞转化率,流式细胞仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布.结果 成功构建SARS-CoV DNA疫苗pVAC-E.Western-blot结果示,转染后的Vero细胞可表达一约9kD大小能被SARS病人血清特异识别的蛋白条带.免疫小鼠中未检测到明显的抗体滴度升高.淋巴细胞转化率在免疫组和对照组间无差别(P＞0.05).脾脏T淋巴细胞亚群分析示免疫组小鼠CD4+细胞显著升高(P＜0.05),CD48+细胞与对照组相比无显著差异.结论 构建的真核表达质粒pVAC-E能在Vero细胞中表达,表达产物具免疫活性,免疫小鼠后能诱导一定的细胞免疫应答.
作者：甘燕；吴少庭；秦莉；潘晖榕；戴五星；袁仕善；黄达娜
来源：中国人兽共患病学报 2006 年 22卷 12期
