目的 在毕赤酵母表达结核分枝杆菌Rv0577基因并鉴定重组蛋白抗原活性.方法 从结核分枝杆菌标准株H37Rv扩增Rv0577基因,TA克隆进入pGEM(R)-T Easy载体,再亚克隆进入pPICZαA.重组质粒pPICZαA-Rv0577经双酶切鉴定并测序证实,线性化后电转化导入毕赤酵母X 33表达;采用Western blot 和Dot blot鉴定抗原活性.结果 双酶切及测序鉴定均证实获得Rv0577基因的正确克隆.pPICZαA-Rv0577在X 33分泌表达的目的 蛋白,通过硫酸铵沉淀、HPLC顺序纯化,获得的纯化蛋白与结核病患者血清进行Dot blot,7份中有3份反应阳性.结论 Rv0577基因在毕赤酵母获得高效表达,重组抗原可被结核病患者血清识别,具有抗原活性.
作者：邓艳琴；王加熊；肖方震；何似；王灵岚；严延生
来源：中国人兽共患病学报 2008 年 24卷 11期
