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目的 构建小鼠巨噬细胞半乳糖特异性凝集素(GSL)靶向的RNAi质粒载体,研究其对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的沉默作用.方法 根据GSL核苷酸序列,合成3条特异性双链小干扰RNA(siRNA)分子,退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,转化大肠杆菌得到阳性克隆,经测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7及尾静脉注射BALB/c小鼠,应用实时定量PCR和免疫组化法评价siRNA载体对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的抑制作用.结果 siRNA载体对小鼠体内GSL基因的抑制率为84-96

作者:葛阳春;王远志;陈创夫;杜军伟;胡圣伟

来源:中国人兽共患病学报 2010 年 26卷 5期

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葛阳春;王远志;陈创夫;杜军伟;胡圣伟
来源:
中国人兽共患病学报 2010 年 26卷 5期
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RNAi 半乳糖特异性凝集素 巨噬细胞RAW264.7 小鼠
目的 构建小鼠巨噬细胞半乳糖特异性凝集素(GSL)靶向的RNAi质粒载体,研究其对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的沉默作用.方法 根据GSL核苷酸序列,合成3条特异性双链小干扰RNA(siRNA)分子,退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen Vector,转化大肠杆菌得到阳性克隆,经测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7及尾静脉注射BALB/c小鼠,应用实时定量PCR和免疫组化法评价siRNA载体对小鼠和巨噬细胞GSL基因表达的抑制作用.结果 siRNA载体对小鼠体内GSL基因的抑制率为84-96