目的 长角血蜱(Hemaphysalis longicornis)不仅吸食家畜血甚至人血,还是多种疾病的传播媒介,对该蜱的研究具有重要的医学和兽医学意义.在大肠杆菌中表达长角血蜱的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)(HlGPx),为该酶在长角血蜱中的生理作用研究奠定基础,为该病媒的免疫防控提供参考.方法 根据长角血蜱EST文库提示的片段序列的信息,设计引物采用PCR方法从长角血蜱成蜱的cDNA中扩增谷胱甘肽过氧化物酶基因.利用定点突变将该基因编码序列中一个编码硒半胱氨酸的密码子TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGC,与表达载体pGEX-4T-1重组,转化BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及免疫印迹分析.结果 成功获得了长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶全长序列,突变后在大肠杆菌中诱导表达了约51kDa的重组蛋白,Western-blot显示表达产物与抗GST抗体有很强的交叉反应.结论 突变的HlGPx可以在大肠杆菌中表达并可用于下一步制备免疫血清及功能分析.
作者：张超颖；郭果为；王正朝；黄晓红
来源：中国人兽共患病学报 2012 年 28卷 9期
