目的 为了解家蝇抗菌分子免疫机制及效应免疫分子的表达情况,运用ssh、real-time PCR,构建家蝇差异表达消减文库.方法 以金黄色葡萄球菌(S.aureus)、大肠杆菌(E.coli)和球孢白僵菌(Beauvoir bassinet bacteria),感染家蝇幼虫构建金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和球孢白僵菌感染的差减文库,成功构建了家蝇抗感染差异表达cDNA文库.结果 文库的阳性克隆进行PCR鉴定主要分布在250～750 bp之间,随机挑取252个白斑进行测序和同源性分析,应用反向Northern斑点杂交技术鉴定了35个基因,其中32个为真阳性,包括抗菌肽、酶、核糖体蛋白,以及一些功能不明的蛋白.结论 运用real-time PCR技术分析了三种蛋白基因的表达情况,结果显示诱导后不同时间点,不同发育阶段抗菌肽均普遍表达,但表达水平存在着明显的差异,诱导后表达明显升高.
作者：王艳；金小宝；朱家勇
来源：中国人兽共患病学报 2014 年 30卷 5期
