目的 融合表达和纯化结核分枝杆菌(MTB)CFP10-ESAT6(CE),初步评价免疫效果.方法 构建pET32a(+)-CE重组质粒,E.coli BL21(DE3)中融合表达,Ni-NTA层析纯化.用CE加铝佐剂,50 μgCE/只/次,分3次免疫BALB/c小鼠.ELISA测定血清IgG抗体;ELISpot与Luminex检测细胞因子,进行MTB体外生长抑制试验.卡介苗(BCG)为阳性对照.结果 CE免疫小鼠,能诱导产生高效价的IgG、IgG1和IgG2a,且IgG1(t=19.1,P＜0.000 1)和IgG2a(t=8.7,P＜0.000 1)抗体水平均高于BCG组.CE组与BCG组诱导产生的分泌IFN-y的斑点形成细胞(SFC)数量差异无统计学意义(t=0.4,P＞0.05),但诱导分泌 IL-4 的 SFC 数量高于 BCG 组(t=8.0,P＜0.000 1)o CE 组诱导分泌 GM-CSF(t=8.4,P＜0.05)、IL-6(t=8.3,P＜0.05)、IL-10(t=2.5,P＜0.05)和 IL-4(t=7.0,P＜0.05)均高于 BCG 组,而 CE 组诱导分泌 IFN-γ(t=1.4,P＞0.05)、TNF-a(t=1.8,P＞0.05)、IL-2(t=2.0,P＞0.05)、IL-12(t=0.9,P＞0.05)和 IL-17(t=1.3,P＞0.05)均与 BCG组相似,差异无统计学意义.CE组小鼠脾细胞的MTB体外生长抑制结果与BCG组相似(t=0.8,P＞0.05).结论 CE免疫小鼠可诱导较强的Th1与Th2混合型免疫反应,且有较强的体外抑制MTB生长的能力,表明CE具有良好的结核疫苗研制应用价值.

作者：栾秀丽；范雪亭；王瑞欢；李马超；于晋杰；钱程宇；曹斌；赵秀芹；刘志广；刘海灿；李桂莲；万康林

来源：中国人兽共患病学报 2022 年 38卷 7期