目的：构建并鉴定pcDNA 3.1(+)/HPV 18 E6及其突变体pcDNA 3.1(+)/E6 F49R、pcDNA 3.1(+)/E6 F127R真核重组表达质粒，并在转染Hela细胞后，检测其对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增HPV 18 E6基因及其突变体HPV 18 E6 F49R、HPV 18 E6 F127R、HPV 18 E6 F49R-F127R基因片段，构建重组表达载体pcDNA 3.1(+)/HPV 18 E 6、pcDNA 3.1(+)/E6 F49R、pcDNA 3.1(+)/E6 F127R，在HeLa细胞中进行转染，48 h后进行MTT试验，利用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法在荧光显微镜下进行细胞形态学的观察。结果成功构建了3种重组表达载体；重组质粒成功转染到Hela细胞中；pcDNA 3.1(+)/HPV 18 E6能促进细胞增殖；pcDNA 3.1(+)/E6 F 49 R和pcDNA 3.1(+)/E6 F127R在一定程度上可抑制表达有E6全长的HPV阳性细胞系Hela的增殖；荧光显微镜下观察到转染了突变体重组质粒的细胞均呈现细胞核皱缩，表现为早起凋亡现象。结论HPV 18 E6及其突变体的真核表达为研究其表达作用机制及为研究预防和治疗子宫癌奠定基础。
作者：左丽君；吴宝杰；刘飞；吴燕雯；范立强
来源：中国生化药物杂志 2014 年 1期
