目的:探讨慢病毒介导的CXCR 7-shRNA转染人胃癌细胞株SGC 7901后重楼总皂苷干预对CXCR7蛋白表达的影响。方法设计并合成CXCR7的3条shRNA序列及1条阴性对照序列,与pSilencerTM 4.1系统合成构建重组慢病毒载体,转染HEK 293 T细胞包装病毒并检测滴度;将3种重组慢病毒载体及阴性对照分别感染人胃癌细胞SGC 7901,RT-PCR检测用药前后CXCR 7 mRNA的表达情况,测定沉默效率,筛选沉默效率最高的一组CXCR 7-shRNA作为后续实验表达载体;MTT法检测转染CXCR 7-shRNA对SGC 7901细胞的增殖的影响以及重楼总皂苷干预后的影响;Western blot检测转染CXCR 7-shRNA后SGC 7901细胞蛋白表达情况以及重楼总皂苷干预的影响。结果测序证实3种慢病毒载体及1组阴性对照载体均包装成功,滴度分别4.9×108 pfu/mL、3.6×108 pfu/mL、5.2×108 pfu/mL和2.0×108 pfu/mL;3组慢病毒载体转染SGC 7901细胞后,CXCR 7 mRNA的表达量均较阴性对照组显著降低(P<0.05),其中CXCR 7-shRNA-1组和重楼总皂苷组对CXCR7的抑制率显著高于其他2组(P<0.05);CXCR 7-shRNA-1转染SGC 7901后,肿瘤细胞的生长增殖显著下降,与其他组相比有显著性差异(P<0.05);CXCR 7-shRNA-1转染SGC 7901后,与空病毒载体组、空白组相比,CXCR 7蛋白表达
作者:赵东文;李谌;王海龙;陆航
来源:中国生化药物杂志 2014 年 2期