基质金属蛋白酶-9(MMP-9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移，并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用.为研究这一蛋白的性质，并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物，在酵母Pichia pastonis中实现了重组人MMP-9蛋白的高效、高活性、分泌表达.首先用PCR扩增了MMMP-9基因编码区(不含信号肽序列)，经测序证实后，将其插入pPIC9质粒中，构建表达载体.用LiC1-PEG法转化酵母后，采用明胶-酶谱法筛选获得5株高效分泌表达MMP-9的克隆，经PCR证实MMP-9基因整合在阳性克隆的染色体中.重组蛋白分子量为93kD，表达量为10 mg/L.重组蛋白可水解明胶及Ⅳ型胶原，并可经有机汞APMA诱导发生自剪切，转换成85 kD的激活形式，表明重组蛋白具有与天然人MMP-9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性.
作者：颜春洪；李春海；田方；朱运峰；孙丽亚
来源：中国生物化学与分子生物学报 2000 年 16卷 2期
