将编码人TNFR75的cRNA与血管内皮细胞特异性启动子(KDRp)及缺失自身启动子的逆转录病毒载体pLXSN-D299重组.重组质粒pLXSN-D299-KDRp-TNFR75与脂质体共转染包装细胞PA317,经抗生素G418(600mg/L)筛选14 d,获得15个稳定的产病毒细胞克隆.将各细胞克隆分别扩大培养收集所产病毒上清,并感染NIH3T3细胞检测病毒滴度,其中1个克隆滴度达2×105CFU/ml.提取该克隆细胞总RNA进行RT-PCR分析,获得的cDNA片段长度与目的基因一致.结果提示,建立了TNFR75反转录病毒产毒细胞系.
作者：孙晓文；刘丽；石缨；刘立忠；谢宝树；王烨；杨彦；冷爱军；曹颖
来源：中国生物化学与分子生物学报 2001 年 17卷 2期
