应用RT-PCR技术,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株1A8中,分别扩增出抗体VH和VL基因,用linker (Gly4Ser)3基因,将VH和VL基因连接成单链抗体(ScFv)基因,并将其克隆至pGEM-T载体中.经核苷酸序列分析证实,VH和VL基因及linker基因拼接正确,ScFv-1A8基因全长为726 bp,编码242个氨基酸,VH和VL基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征,分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)和轻链κⅣ家簇.将ScFv-1A8基因克隆至表达载体pHOG21中,构建了重组质粒pHOG-1A8,然后转化至受体菌XL1-BLUE中,得到重组菌株XL1-BLUE (pHOG-1A8).ELISA检测和SDS-PAGE分析表明:经IPTG诱导后所表达的目的蛋白存在于重组菌株XL1-BLUE (pHOG-1A8)的胞周质中.经薄层扫描分析:重组菌株XL1-BLUE(pHOG-1A8)的蛋白表达产物占菌体可溶性蛋白的12
作者：赵宝华；许崇波；边艳青；段相林；朱平
来源：中国生物化学与分子生物学报 2003 年 19卷 6期
