为了分离鼻咽癌差异表达基因, 应用抑制性扣除杂交技术,在正向抑制性扣除杂交中,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1 cDNA作为检测子,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为驱赶子;在反向抑制性扣除杂交中,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为检测子, 以鼻咽癌上皮细胞株HNE1 cDNA作为驱赶子,分别通过抑制性扣除杂交,构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1表达下调和表达上调的两个扣除cDNA文库.从鼻咽癌相关的扣除cDNA文库中随机挑取1200个克隆,采用菌落PCR扩增其插入cDNA片段,自动点膜制备成cDNA 微阵列膜,分别用鼻咽癌上皮细胞株HNE1、人胚鼻咽上皮mRNA经逆转录标记cDNA探针,分别与cDNA 微阵列膜杂交,通过杂交信号的自动扫描分析,对杂交信号存在5倍差异的克隆进行测序,获得了10个鼻咽癌差异表达基因的cDNA片段,其中3个为新基因序列,其GenBank登录号为:AF510188、AF510189和AF510190,7个代表已知基因序列.采用RT-PCR证实S100A8,CK19和RBP1基因在人胚鼻咽上皮中高表达而在鼻咽癌细胞株HNE1中低表达.这些结果显示上述基因可能是鼻咽癌发生的重要因素.
作者：张必成；周洁；朱诗国；龚佳蕾；聂新民；吕红斌；何显锋；李小玲；胡赓熙；李桂源
来源：中国生物化学与分子生物学报 2003 年 19卷 6期
