目的 构建表达hTRAIL基因的重组腺病毒载体.方法 以重组质粒pThioHisA-TRAIL中提取的TRAIL基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-CMV-TRAIL,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-TRAIL,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长TRAIL基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-TRAIL).氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-TRAIL病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测TRAIL基因在293细胞中的转录.以Ad-TRAIL转染YTMLC细胞,采用免疫荧光法和流式细胞术检测TRAIL基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒颗粒数为2.77×1012VP/ml,感染性滴度为109.5(3.2×109)CCID50/ml.经RT-PCR扩增出约843bp的基因片段,与目的片段大小一致.流式细胞术和免疫荧光法均检测到TRAIL在YTMLC细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中.结论 已成功构建了表达hTRAIL重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.
作者：杨芳；易山；李鸿钧；谢天宏；施锐；孙茂盛
来源：中国生物制品学杂志 2007 年 20卷 9期
