目的 构建并筛选小鼠聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)基因的RNAi表达质粒,为肿瘤基因治疗探索新途径.方法 根据GenBank中报道的PARP-1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectamineTM2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株.48 h后,采用RT-PCR技术检测转染细胞中PARP-1基因mRNA的转录水平.筛选有效的PARP-1 RNAi质粒.结果 4种重组PARP-1RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确.转染后48 h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo-PARP-1-1308和pGPU6/GFP/Neo-PARP-1-1837的Lewis细胞PARP-1基因mRNA的转录水平降低,转染pGPU6/GFP/Neo-PARP-1-1308组下降更明显,以其作为后续实验的有效质粒.结论 已成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为PARP-1基因RNAi治疗肿瘤的研究奠定了基础.
作者：王铁君；韩成敏；李星花；尹金植；陈玉丙；王红勇；李英普
来源：中国生物制品学杂志 2009 年 22卷 2期
