目的 原核表达、纯化重组结核杆菌Ag85a-ESAT6融合蛋白.并检测其生物活性.方法 将Ag85a-ESAT6融合基因片段插入pET-28a(+)载体中,构建重组质粒pET-28a.Ag85a.ESAT6.转化大肠杆菌B127I(DE3),IPTG诱导表达.表达产物在变性条件下经Ni.琼脂糖凝胶层析柱纯化复性后,在体外对经5种不同类型的表达结核杆菌Ag85a和ESAT6的重组痘苗病毒免疫的小鼠脾淋巴细胞进行刺激,以MTT法检测脾淋巴细胞的增殖反应.结果 重组质粒pET.28a-Ag85a-ESAT6经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约41 000,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的55.65
作者：张群；朱琳；楼觉人
来源：中国生物制品学杂志 2010 年 23卷 11期
