目的 建立实时荧光定量PCR法检测肝癌患者血浆端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因水平.方法 提取人全血基因组DNA,常规PCR扩增hTERT基因,与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌DH5α,提取重组质粒pMD18-T-hTERT作为定量检测的标准品,绘制实时荧光定量PCR标准曲线,并进行方法的验证.采用建立的实时荧光定量PCR法检测肝癌患者和健康人血浆中hTFRT DNA的水平.结果 重组质粒pMD18-T-hTERT经PCR及测序鉴定证明构建正确.以该重组质粒为标准品绘制的标准曲线在103～108 copies/μl浓度范围内线性关系良好,相关系数R2为0.997;批内及试验间变异系数分别为0.86
作者：杨英俊；陈辉
来源：中国生物制品学杂志 2010 年 23卷 12期
