目的 探讨丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)2a FL-J6JFH NS5A基因置换对1b型HC-J4复制和感染性的影响,为建立HCV 1b细胞模型奠定基础.方法 将JFH1 NS5A置换至HC-J4基因组内,构建嵌合全长基因组HC-J4/JFHNS5A.体外制备野生型HC-J4、嵌合体及FL-J6JFH的RNA转录体,脂质体介导转染Huh-7.5细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)检测转染细胞内的蛋白表达,HCV负链RNA特异性RT-PCR法和荧光定量PCR方法(FQ-PCR)检测基因复制情况.转染后不同时间收集转染细胞上清,感染naive Huh-7.5细胞,观察其感染性.结果 IFA未观察到野生型HC-J4和嵌合体转染细胞内HCV蛋白的表达,但在转染后18 d内的各个时间点,均检测到HCV负链RNA,表明嵌合体和野生型HC-J4在转染细胞内呈低水平复制.转染后第9天和12天,FQ-PCR检测表明,嵌合体转染细胞内HCV RNA水平明显高于野生型转染的细胞(P<0.05).不同时间点转染细胞上清感染naive Huh-7.5细胞后.IFA均未观察到表达HCV蛋白的阳性细胞.结论 JFH1 NS5A蛋白虽然在一定程度上可提高1b型HC-J4株在体外培养细胞中的复制能力,但还不足以产生能够检测到的感染性病毒颗粒.HCV 1b细胞模型的建立尚受其他因素的影响.
作者：王永智；王文博；许刚；曹明媚；任浩；戚中田
来源：中国生物制品学杂志 2011 年 24卷 4期
