目的 构建携带肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)基因的减毒沙门菌工程菌株,并检测其体外活性.方法 从人胎盘cDNA文库中PCR扩增人HGF基因,克隆至真核表达载体pcK上,构建重组表达质粒pcKH,电穿孔法转入减毒沙门菌Ty21a中,获得携带HGF基因的减毒沙门菌工程菌株.将该菌株转染胃黏膜上皮细胞GES-1,48 h后采用ELISA方法检测上清中HGF蛋白的表达水平,MTT法检测不同浓度HGF表达产物对GES-1细胞增殖活力的影响.结果 克隆的人HGF基因序列与GenBank中登录的人HGF cDNA序列(M60718.1)完全一致；重组表达质粒pcKH经双酶切鉴定构建正确；成功构建了携带HGF基因的减毒沙门菌工程菌株,可有效转染GES-1细胞,并表达活性HGF蛋白(14～16 ng/6×105个细胞),其可显著刺激GES -1细胞增殖(P＜0.05).结论 已成功构建携带HGF基因的减毒沙门菌工程菌株,其可能具有在体内治疗胃肠疾病的潜能.
作者：杨志华；赵曼；哈小琴；董芳；张尚娣；贾庆华
来源：中国生物制品学杂志 2011 年 24卷 12期
