目的 探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi α-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因的表达对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响.方法 根据GenBank中登录的人GMⅡ基因mRNA序列及siRNA设计原则,设计了4条siRNA,并构建4个针对靶点的重组表达质粒pGPU6/GFP/Neo-1140、pGPU6/GFP/Neo-1303、pGPU6/GFP/Neo-1406和pGPU6/GFP/Neo-1817,同时合成阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC,经Lipofectamine 2000分别转染BGC-823细胞,通过RT-PCR及Westernblot检测转染细胞中GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达,筛选沉默效果最佳的质粒；经MTT试验、细胞周期分布分析、Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI双染试验分别检测沉默GMⅡ基因对人BGC-823细胞增殖与凋亡的影响.结果 pGPU6/GFP/Neo- 1303组GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05),表明pGPU6/GFP/Neo-1303组沉默效果最好；与空白对照组和阴性对照组相比,pGPU6/GFP/Neo- 1303组BGC-823细胞增殖抑制率明显升高(P＜0.01),G1期细胞比例明显上升(P＜0.05),S期细胞比例明显下降(P＜0.01),细胞凋亡率明显升高(P＜0.05).结论 已成功沉默BGC-823细胞中GMⅡ基因的表达,从而抑制BGC-823细胞的增殖并促进其凋亡,GMⅡ可能成为防治胃癌的新靶点.

作者：杨雅莹；易永芬

来源：中国生物制品学杂志 2012 年 25卷 8期