目的 构建人周期素依赖性激酶10(cyclin-dependent kinase 10,CDK10)真核表达质粒,并进行鉴定.方法 采用RT-PCR法从人鼻咽癌细胞株HNE1中扩增CDK10基因全长编码区序列,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-CDK10,转染人鼻咽癌细胞株CNE-2,采用Western blot法检测转染细胞中CDK10蛋白的表达水平.结果 重组真核表达质粒pcDNA-CDK10经双酶切及测序证实构建正确;经800μg/ml的G418筛选2周后,获得过表达CDK10的稳定转染细胞系CDK10c1和CDK10c2;与空载体转染对照组相比,CDK10c1和CDK10c2细胞中CDK10蛋白的表达量均显著升高(P均＜0.05).结论 成功构建了人CDK10真核表达质粒.
作者：游颜杰；苑艺；李文梅；刘佳佳；张晓辉
来源：中国生物制品学杂志 2015 年 28卷 1期
