目的 构建人转录因子T-bet基因与乙肝病毒表面抗原大蛋白全长基因(hepatitis B virus surface antigen large protein,HBV-L)的共表达载体,并检测其在体外的表达.方法 利用PCR及基因重组技术,以人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的cDNA为模板,扩增获得人T-bet全长基因,以含有HBV-L的质粒pcDNA3.1-HBV-L为模板,扩增获得HBV-L基因,将上述2个基因克隆至真核表达质粒pIRES中,获得共表达质粒pIRES-T-bet-HBV-L.将该质粒转染293T细胞,经RT-PCR、ELISA和细胞免疫荧光试验检测其在真核细胞中的表达.结果 限制性酶谱分析及测序证实重组质粒pIRES-T-bet-HBV-L构建成功;该质粒在体外转染293T细胞后,可表达T-bet与HBV-L两者的mRNA;细胞免疫荧光试验和ELISA检测结果证实,该质粒转染293T细胞后可表达T-bet和HBV-L蛋白.结论 成功构建了共表达质粒pIRES-T-bet-HBV-L,该质粒能在293T细胞中表达.
作者：何秀贞；晏永波；诸梦露；林绍强
来源：中国生物制品学杂志 2017 年 30卷 6期
