目的 建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方法;用VWF国际标准品(NIBSC07/316)标定内控标准品(无FⅧ的VWF),确定VWF∶Ag的国际单位(Ag/ml)与质量单位(μg/ml)的关系;对建立的方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性验证;将验证后的该方法用于FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析.结果 捕获抗体和检测抗体稀释度均为1∶200;VWF∶Ag的1 Ag/ml对应16 μg/ml;标准曲线的线性范围为160～10 ng/ml,各浓度回收率在95.8％～103.2％之间,变异系数(CV)＜5％,R2≥0.99;不同浓度样品检测结果的批内回收率在93.0％～ 113.9％之间,批间回收率在95.1％～105.5％之间;批内CV在0.7％ ～ 8.2％之间,批间CV在3.8％ ～ 9.6％之间;样品添加试验的回收率在96.9％～114.7％之间.具有生物学活性的样品应-80℃冻存,复融1次后立即检测;国药集团武汉血液制品有限公司FⅧ纯化工艺中PEG沉淀和离子交换层析去除了95％以上的VWF,工艺稳定性较好,成品具有与血浆接近的FⅧ∶Ag/VWF∶Ag比值.结论 建立的人VWF抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法具有良好
作者：周志军；林连珍；彭焱；李陶敬；李策生；胡勇
来源：中国生物制品学杂志 2017 年 30卷 10期
