目的 原核表达H7N9流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)球状区,并评价其免疫原性.方法 根据H7N9流感病毒HA晶体结构,设计含有2对和3对二硫键的球状区结构域HA 1S (62-284 aa)和HA1L(57-289 aa),扩增后连接至pET-21b(+)载体,构建重组表达质粒pET-21b(+)-HA1S和pET-21b(+)-HA1L,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的包涵体经复性和柱层析纯化获得球状区蛋白.纯化的目的蛋白分别以CpG X1、Al(OH)3和CpG X1+Al(OH)3为佐剂免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清抗体水平和中和抗体水平,评价其免疫原性.结果 重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确.两个目的蛋白能在大肠埃希菌中表达,经稀释复性和柱层析纯化后均为单体,HPLC检测纯度均大于95％.动物试验结果表明,单独使用CpG X1或Al(OH)3不能增强免疫应答,同时使用CpG X1+ Al(OH)3能将IgG抗体水平提高3倍左右.体外假病毒中和试验结果表明,中和抗体水平均较低.结论 在大肠埃希菌中高效表达了H7N9 HA1S和HA1L两个蛋白,纯化后的蛋白为均一稳定的单体,且具有一定的免疫原性,为进一步研发快速生产H7N9流感病毒基因工程疫苗提供了参考.
作者：李春明；王若涵；周军；权娅茹；冯靖
来源：中国生物制品学杂志 2017 年 30卷 12期
