目的 建立测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖绝对含量的定量1H核磁共振法(nuclear magnetic resonance,NMR,即1H-NMR法),并进行验证.方法 精密称取Hib荚膜多糖粉末,重水溶解,配制一定浓度的供试品多糖溶液;采用Bruker Avance-600型超导核磁共振波谱仪,设置NMR实验参数条件,以重水为溶剂,二甲基砜为内标物建立定量1H-NMR法进行多糖含量测定;对该方法进行专属性、准确度、线性、精密度及耐用性验证;应用建立的定量1H-NMR法及化学法测定5批Hib荚膜多糖含量.结果 经1H-NMR谱、13C-NMR谱、1H-1H COSY谱及1H-13C HSQC谱归属显示,Hib荚膜多糖的定量峰(δH5.06)及内标物二甲基砜的定量峰(δH3.14)分离良好,互不干扰,且不受样品内其他谱峰的干扰,方法专属性良好;供试品溶液加入100、150及200 μL国际标准品,加标回收率在101%~ 102%;Hib多糖质量浓度在1~20 mg/mL范围,线性方程为y=0.234 3 x-0.002 6(R2=1.0000);供试品溶液6次重复性及中间精密度测定的定量峰积分面积比值的RSD分别为0.78%及0.60%,精密度良好;5 mg/mL的供试品溶液在不同脉冲角度及不同延迟时间定量峰积分面积比的RSD分别为0.07%及0.13%,耐用性良好.5批荚膜多糖经定量1H-NMR法及化学法检测,核糖含量均在《中国
作者:许美凤;毛琦琦;赵丹;陈苏京;李亚南;李茂光;叶强
来源:中国生物制品学杂志 2019 年 32卷 9期