目的 构建人磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(inositol polyphosphate 4-phosphatase type Ⅱ,INPP4B)重组慢病毒表达载体,并检测其在人雄激素抵抗型前列腺癌细胞株PC3中的表达.方法 以人工合成的人INPP4B基因为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆入pGC-FU载体构建重组质粒pGC-FU-INPP4B,将其与辅助包装原件PHelper 1.0和PHelper 2.O载体经LipofectamineTM 2000介导共转染293T细胞,包装获得携带人INPP4B基因的重组慢病毒Lenti-INPP4B,免疫荧光法测定病毒滴度.用Lenti-INPP4B感染PC3细胞(Lenti-INPP4B组),以慢病毒Lenti-GFP(携带GFP基因)感染的PC3细胞为阴性对照,RT-PCR及Western blot检测PC3细胞中INPP4B mRNA水平和蛋白的表达,CCK8法检测PC3细胞增殖;Western blot检测PC3细胞中p-AKT水平.结果 经PCR及测序鉴定,重组质粒pGC-FU-INPP4B构建正确;Lenti-INPP4B病毒滴度达2× 10-8TU/mL.与阴性对照组比较,Lenti-INPP4B组PC3细胞中INPP4B mRNA水平显著提高(P＜0.05),细胞活力抑制显著(P＜0.05),细胞内p-AKT水平降低;INPP4B蛋白在Lenti-INPP4B组细胞中表达,在阴性对照组中未表达.结论 成功构建了INPP4B慢病毒表达载体,其在PC3细胞中的表达能显著抑制细胞增殖,可能是通过下调p-AKT水平发挥作用.本文为靶向治疗雄激素抵抗型前

作者：丁焕；孙颖；黎莉

来源：中国生物制品学杂志 2020 年 33卷 7期