目的 建立用于检测胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂融合蛋白纯度的反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证.方法 采用 Agilent ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×150 mm)分析柱和 ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×12.5 mm)保护柱.色谱条件:流动相A液:0.1％三氟乙酸水溶液;流动相B液:0.1％三氟乙酸的乙腈溶液;上样体积:100 μL;工作流速:0.50 mL/min;A 相溶液平衡系统至基线平稳,开始进样;0～5 min:0～50％B;5～15 min:50％～60％B;15～20 min:60％～100％B;20～30 min:100％B;8 min:100％A;检测波长:280 nm;柱温箱温度:40℃.验证方法的系统适用性、专属性、灵敏度、重复性、中间精密性和耐用性.采用建立的方法检测6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度.结果理论塔板数为26 891,对称因子为0.64;空白对照(稀释液)、阴性对照[抗凝血酶-Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)及睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)]对色谱图无干扰峰,GLP-1受体激动剂融合蛋白与阴性对照分离度＞1.5;方法 的灵敏度为4.8 μg/mL;重复性验证峰面积百分比的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.35％,保留时间RSD为0.07％;中间精密

作者：高雪峰；王婉如；郑伟峰；杨军；张艳丽；马亚茹；陈勇

来源：中国生物制品学杂志 2022 年 35卷 4期