目的 构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,并观察其在共转染的人骨髓基质细胞中的表达情况.方法 应用基因重组技术,构建TPO-Pegfp-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,在脂质体介导下将其导入体外培养的人骨髓基质细胞内,24h后观察TPO、IL-6、IL-11瞬时表达情况、蛋白含量及表达,并与未转染组、空载体转染组做对比.结果 1)酶切及测序结果均可证实TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体的正确性.2)细胞转染24 h后,荧光显微镜下可观察到pEGFP-N1的表达,25％细胞发出绿色荧光；免疫细胞化学染色检测出IL-6及IL-11转染后能在细胞内表达.3)转染48 h后,Western blot检测出骨髓基质细胞内TPO、IL-6及IL-11的蛋白表达量.结论 TPO、IL-6、IL-11这3个基因可共转染人骨髓基质细胞,并在细胞内有效表达.
作者：林放；王甜甜；王世春；孟强；尹智平；陆华；蒋天伦；赵树铭
来源：中国输血杂志 2012 年 25卷 3期
