目的 利用国产IVIg初步探讨抗-Aβ的分离纯化技术.方法 首先,用人工合成的人源Aβ1-42进行聚合以制备Aβ寡聚体并通过SDS-PAGE对其进行鉴定.其次,通过偶联缓冲液(0.6 mol/L柠檬酸钠、0.2 mol/L碳酸钠,PH:10)将制备好的Aβ偶联到UltraLink Biosupport凝胶上,然后将稀释后的IVIg加入到偶联好的凝胶上,经过平衡(0.1 mol/L PBS,PH:7.4)、洗涤(0.1 mol/L PBS,PH:7.4)、洗脱(0.1 mol/L甘氨酸缓冲液,PH:2.2),从而分离纯化出抗-Aβ.最后,通过ELISA和SDS-PAGE鉴定纯化出的抗-Aβ抗体.结果 聚合的Aβ1-42除了合有少量尚未聚合的单体外,主要为不同分子量的寡聚体(如:三聚体、八聚体、十二聚体等).所获得抗-Aβ回收率为21.1%、比活为9 671.9 ng/mg、提纯倍数为248.结论 使用离心柱法亲和层析可从国产IVIg制品中分离纯化出抗-Aβ.
作者:辛叶;曹海军;叶生亮;李长清
来源:中国输血杂志 2015 年 28卷 5期