目的研究构建重组表达体系pCKM-mPTH质粒,寻找甲状旁腺功能低下症的基因治疗途径. 方法采用重叠聚合酶链反应(PCR)法、巢式PCR法及粘端连接法构建pCKM-mPTH质粒,以脂质体转染骨骼肌细胞,用β-actin半定量和放免法分别测定其在细胞内外的表达. 结果嵌合基因 pCKM-mPTH质粒测序完全符合已知核苷酸序列,并完成定点突变,转染骨骼肌细胞后,β-actin半定量法测得mPTH在细胞内成功高效表达,放免法测得24h克隆细胞培养液中甲状旁腺激素蛋白的含量为26.37ng/L. 结论成功构建了SD(Sprague Dawley)大鼠重组基因表达体系pCKM-mPTH质粒,并证实其在骨骼肌细胞中有高效表达.
作者：朱易凡；王深明；王劲松
来源：中国实用外科杂志 2003 年 23卷 11期
