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目的:探讨人参皂苷Rh2诱导人急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)Jurkat细胞的凋亡及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的Rh2(0、10、20、40和80μg/ml)对Jurkat细胞增殖活性的影响,并计算48 h下Rh2对Jurkat细胞的半抑制浓度(IC50);采用形态学方法及Hoechst 33258荧光染色观察IC50剂量下Rh2共培养48 h的Jurkat细胞凋亡状况.后将细胞实验分为4组:对照组、Rh2(IC50)组、PI3K抑制剂LY294002(50μmol/l)组以及Rh2(IC50) +LY294002(50 μmol/l)组.同步培养48 h后,采用PI单染和Annexin V-FITC/PI双染分别检测Jurkat细胞凋亡及细胞周期变化;采用Western blot检测各组Jurkat细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Cleaved-Caspase 3,细胞周期相关蛋白Cyclin D1以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT、p-AKT的表达水平.结果:Rh2(10-80 μg/ml)呈剂量-时间依赖性抑制Jurkat细胞增殖(r48h=0.999,P<0.01;r80 μg/ml=0.991,P>0.05),并伴有明显的细胞凋亡形态学改变.流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,Rh2组和LY294002组细胞凋亡率显著增加,且细胞多数被阻滞在G0/G1期;而与Rh2组和LY294002组比较,Rh2+LY294002组细胞凋亡及细胞阻滞现象更为显著.Western blot结果显示,与对照组比较

作者:聂柳;彭罕鸣

来源:中国实验血液学杂志 2019 年 27卷 4期

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作者:
聂柳;彭罕鸣
来源:
中国实验血液学杂志 2019 年 27卷 4期
标签:
人参皂苷Rh2 急性T淋巴细胞白血病 细泡凋亡 PI3K/AKT通路
目的:探讨人参皂苷Rh2诱导人急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)Jurkat细胞的凋亡及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的Rh2(0、10、20、40和80μg/ml)对Jurkat细胞增殖活性的影响,并计算48 h下Rh2对Jurkat细胞的半抑制浓度(IC50);采用形态学方法及Hoechst 33258荧光染色观察IC50剂量下Rh2共培养48 h的Jurkat细胞凋亡状况.后将细胞实验分为4组:对照组、Rh2(IC50)组、PI3K抑制剂LY294002(50μmol/l)组以及Rh2(IC50) +LY294002(50 μmol/l)组.同步培养48 h后,采用PI单染和Annexin V-FITC/PI双染分别检测Jurkat细胞凋亡及细胞周期变化;采用Western blot检测各组Jurkat细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Cleaved-Caspase 3,细胞周期相关蛋白Cyclin D1以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT、p-AKT的表达水平.结果:Rh2(10-80 μg/ml)呈剂量-时间依赖性抑制Jurkat细胞增殖(r48h=0.999,P<0.01;r80 μg/ml=0.991,P>0.05),并伴有明显的细胞凋亡形态学改变.流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,Rh2组和LY294002组细胞凋亡率显著增加,且细胞多数被阻滞在G0/G1期;而与Rh2组和LY294002组比较,Rh2+LY294002组细胞凋亡及细胞阻滞现象更为显著.Western blot结果显示,与对照组比较