目的 重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床诊断和病情监测.方法 针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a(+),构建重组表达载体PET28a(+)-gp:210,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋自,进一步经Ni2+亲合层析柱纯化.应用重组gp210融合蛋白建立间接ELISA,检测PBC患者血清中的抗gp210抗体.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PET28a(+)-gp210重组质粒.经SDS-PAGE、Westem-blot鉴定,获得了具有免疫原性的重组gp210融合蛋白.经ELISA检测,PBC患者中抗gp210抗体的阳性率为40.5
作者：周晔；蒋天舒；陈燕；陈波；谷明莉；仲人前；邓安梅
来源：中国实验诊断学 2007 年 11卷 6期
