目的：构建人血管生成素‐2（Ang‐2）短发夹RNA（shRNA）真核表达质粒，观察其在内质网应激（ERS）状态下对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖和凋亡的影响，探讨Ang‐2基因在 ERS状态下介导血管内皮细胞凋亡的作用和机制。方法采用DNA重组技术根据人Ang‐2 mRNA序列设计并合成2条shRNA寡核苷酸片段，构建表达质粒并通过脂质体介导转染 HUVECs ，对 Ang‐2基因进行RNA沉默，采用RT‐PCR和Western blot分别检测Ang‐2在ERS状态下mRNA及蛋白质的表达。结果经双酶切和测序鉴定证实，2个shRNA表达载体均构建成功。与空白对照、阴性对照组相比，Ang2‐1‐shRNA、Ang2‐2‐shRNA组HUVECs中Ang‐2基因mRNA及蛋白表达水平均降低，其中，Ang2‐1‐shR‐NA干扰效果最强。Ang‐2 mRNA和蛋白的抑制率分别达79.29％、68.21％。沉默 Ang‐2基因可增加ERS状态下HUVECs细胞活力及抑制其凋亡。结论成功构建靶向Ang‐2基因的shRNA真核表达载体，Ang‐2基因沉默对ERS状态下HUVECs凋亡有抑制作用。Ang‐2基因可抑制血管内皮细胞体外增殖，增强ERS状态下HUVECs凋亡。
作者：何泉；徐盈；唐新华；刘衡；朱宝生；蒋绿芝
来源：中国糖尿病杂志 2015 年 2期
