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目的 探讨是否可以通过沉默Nogo-66的受体(NgR)基因的方法提高神经干细胞(NSCs)移植对脊髓半横断损伤大鼠的治疗效果.方法 取胎龄为14~16 d的Wistar胎鼠脑组织,体外培养NSCs,经小分子干扰RNA(siRNA)转染以沉默NgR基因,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测NSCs在转染前后NgR的蛋白表达.另将36只Wistar大鼠按随机数字表法均分成3组,切断胸8、胸9段右半侧脊髓致伤.A组为注射等量不含NSCs的培养液对照组;B组为单纯NSCs移植组;C组为沉默NgR基因NSCs移植组.各组分别于伤后1、2、4、6、8周采用斜板实验进行行为学评估,观察神经恢复情况.第4周取脊髓组织制备病理切片,行苏木素-伊红(HE)染色及5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫组化染色;8周后取脊髓组织,行辣根过氧化物酶(HRP)示踪观察.结果 转染siRNA后,NgR的蛋白表达水平较转染前明显降低(1.03±0.08比1.88±0.15,P=0.002).斜板实验:8周时,B、C两组大鼠后肢运动功能均明显恢复,C组较B组为快(P<0.05).A组切片未见神经轴索通过,B、C组可见少量神经轴索样结构.BrdU阳性细胞及HRP阳性神经纤维束数C组>B组>A组(BrdU阳性细胞:A组(39.82±14.07)个、B组(91.68±12.34)个、C组(103.67±11.52)个,HRP阳性神经纤维束:A组(11.35±1.71)个、B组(39.87±2.42)个、C组(83.64

作者:王东;张建军;杨忠旭

来源:中国危重病急救医学 2010 年 22卷 1期

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王东;张建军;杨忠旭
来源:
中国危重病急救医学 2010 年 22卷 1期
标签:
神经干细胞 Nogo-66的受体 RNA干扰 脊髓损伤 功能恢复 Neural stem cell Nogo-66 receptor RNA interference Spinal cord injury Functional recovery
目的 探讨是否可以通过沉默Nogo-66的受体(NgR)基因的方法提高神经干细胞(NSCs)移植对脊髓半横断损伤大鼠的治疗效果.方法 取胎龄为14~16 d的Wistar胎鼠脑组织,体外培养NSCs,经小分子干扰RNA(siRNA)转染以沉默NgR基因,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测NSCs在转染前后NgR的蛋白表达.另将36只Wistar大鼠按随机数字表法均分成3组,切断胸8、胸9段右半侧脊髓致伤.A组为注射等量不含NSCs的培养液对照组;B组为单纯NSCs移植组;C组为沉默NgR基因NSCs移植组.各组分别于伤后1、2、4、6、8周采用斜板实验进行行为学评估,观察神经恢复情况.第4周取脊髓组织制备病理切片,行苏木素-伊红(HE)染色及5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫组化染色;8周后取脊髓组织,行辣根过氧化物酶(HRP)示踪观察.结果 转染siRNA后,NgR的蛋白表达水平较转染前明显降低(1.03±0.08比1.88±0.15,P=0.002).斜板实验:8周时,B、C两组大鼠后肢运动功能均明显恢复,C组较B组为快(P<0.05).A组切片未见神经轴索通过,B、C组可见少量神经轴索样结构.BrdU阳性细胞及HRP阳性神经纤维束数C组>B组>A组(BrdU阳性细胞:A组(39.82±14.07)个、B组(91.68±12.34)个、C组(103.67±11.52)个,HRP阳性神经纤维束:A组(11.35±1.71)个、B组(39.87±2.42)个、C组(83.64