目的 探讨脂多糖(LPS)诱导人THP-1巨噬细胞自噬过程中微小RNA-101和微小RNA-125a-5p(miR-101、miR-125a-5p)的调控作用.方法 体外培养人白血病单核细胞THP-1,用佛波醇(PMA,50 μg/L)诱导THP-1细胞48 h分化成巨噬细胞,以0、250、500、1 000 μg/L梯度LPS刺激细胞12h,以转染试剂脂质体Lipofectamine RNAiMAX介导miRNA模拟物(miR-mimic)转染细胞,荧光显微镜下观察miRNA的转染效率.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的释放量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞内自噬相关蛋白ATG4D、Beclin1、LC31Ⅱ的蛋白表达;采用定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-101和miR-125a-5p的表达.结果 ①250、500、1000μg/L LPS刺激THP-1巨噬细胞12 h后,TNF-α和MCP-1释放量较未用LPS刺激细胞显著升高[TNF-α(ng/L):1 336.1±18.5、1 340.6±24.8、1 364.5±14.9比47.6±4.4,MCP-1 (ng/L):996.3±51.3、934.6±84.3、974.2±69.5比21.3±6.5,均P＜0.01],但3个剂量组间无统计学差异.250、500、1 000μg/L LPS刺激细胞12h后,细胞内ATG4D、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达均较未用LPS刺激细胞明显上调(ATG4D的f值分别为8.103、38.410、52.020,P值分别为0.01

作者：许婕灵；张振辉；江慧琳；林珮仪；陈晓辉

来源：中华危重病急救医学 2016 年 28卷 4期