目的 探讨Toll样受体4(TLR4)、髓质分化蛋白2(MD2)、基质相互作用蛋白1(STIM1)对细菌内毒素(LPS)诱导血管内皮细胞钙超载损伤及炎症反应的影响.方法 DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC).① 高保真反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LPS刺激前及刺激后0.5、1、6、12、24 h的TLR4、MD2、核转录因子-κB(NF-κB)表达.② 用psiSTIM、psiTLR转染细胞,激光共聚焦检测其对LPS刺激HUVEC钙内流的影响.③psiTLR转染12 h后用LPS刺激6 h,免疫共沉淀法检测抗TLR4抗体沉淀细胞裂解液中MD-2、STIM1、NF-κB蛋白表达.④ 在LPS刺激HUVEC基础上,给予NF-κB抑制剂PDTC 0.1 mg/L或1 mg/L以及转染psiTLR表达载体1 h或12 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,RT-PCR检测STIM1、NF-κB的mRNA表达.结果 ①LPS刺激HUVEC后,上清液中TLR4、MD2、NF-κB的mRNA表达水平(2-ΔΔCt)逐渐升高,均于6 h达峰值,分别为23.52±2.88、17.43±3.43、18.13±2.99;与LPS刺激前(分别为7.02±2.81、5.19±3.22、8.11±1.42)比较差异均有统计学意义(均P<0.05).②psiSTIM可显著抑制LPS诱导细胞外钙离子内流峰值(Peak[Ca2+])显著升高(nmol/L:62.61±14.12比108.13±22.33,P<0.05);psiTLR也可

作者：肖建国；宋青；黎檀实；孙荣距

来源：中华危重病急救医学 2017 年 29卷 2期