目的 探讨百草枯(PQ)能否诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成.方法 分离健康者外周血中性粒细胞,苏木素-伊红(HE)染色后进行细胞鉴定;分别采用浓度为0(对照)、200、400、600、800、1 000、1 200 μmol/L的PQ溶液处理细胞,建立PQ中毒的体外模型,应用CCK-8细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒检测细胞存活率,选择半数致死量的PQ浓度作为实验干预点.根据细胞活性检测结果进行细胞染毒(PQ染毒组),以未染毒细胞作为对照.采用免疫荧光染色显微成像定性鉴定NETs形成情况;采用PicoGreen核酸定量分析试剂盒检测细胞上清中游离DNA含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞上清中瓜氨酸化组蛋白3 (H3Cit)、髓过氧化物酶(MPO)的蛋白表达.结果 HE染色鉴定中性粒细胞纯度约95％;经不同浓度PQ建立中毒体外模型后发现,PQ浓度为800 μmol/L时细胞存活率为(58±2)％,以该半数致死量作为实验干预点.免疫荧光定性观察显示,对照组中性粒细胞仅有少量H3Cit及MPO表达,无NETs形成;而800 μmol/L PQ可以刺激中性粒细胞产生由DNA、H3Cit和MPO形成的NETs.定量结果显示,与对照组比较,PQ染毒组细胞上清中游离DNA含量显著升高(μg/L:2235±462比561±87,P＜0.01);且PQ染毒组细胞上清中H3Cit和MPO蛋白表达量均较对照组明
作者：金卫；陆健；谢晖；蒋逸群；孟潇潇；朱勇；王瑞兰
来源：中华危重病急救医学 2017 年 29卷 3期
