目的:明确热休克转录因子1(HSF1)是否通过调控大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活性改善脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)。方法:采用随机数字表法将24只SPF级SD大鼠分为对照组、脂多糖(LPS)组、过表达空载+LPS组、过表达HSF1+LPS组,每组6只。采用腹腔注射LPS 5 mg/kg制备脓毒症诱导的ALI大鼠模型;对照组给予等量生理盐水。过表达空载+LPS组和过表达HSF1+LPS组分别于制模前经气管内滴注过表达空载腺病毒或过表达HSF1腺病毒100 μL;对照组和LPS组滴注等量生理盐水。制模后6 h取颈动脉血,测定氧合指数(PaO
2/FiO
2);取肺组织,苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察肺组织病理学改变,测定肺组织湿/干质量(W/D)比值,采用免疫组化法检测巨噬细胞特异性标志抗体CD68的阳性表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测HSF1和NLRP3的蛋白表达水平;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL-1β、IL-18)的水平。另取正常大鼠BALF,分离原代AM培养并分为4组。空白对照组AM正常培养,不给予任何处理;LPS组采用1 mg/L的LPS处理AM 24 h制备LPS攻击模型;过表达空载+LPS组和过表达HSF1+LPS组分别用空载质粒或过表
作者:金灿;张伟
来源:中华危重病急救医学 2022 年 34卷 11期