目的 主要为了获得胆色素原脱氨酶(PBGD)在大肠杆菌中的原核重组表达蛋白,并对其进行纯化,为下一步研究PBGD结构及功能提供实验基础.方法 以人细胞中的总lRNA逆转录得到的cDNA为模板,PCR扩增,构建pET28a(+)-PBGD重组质粒.把含有外源片段的pET28a-PBGD重组质粒转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,经His纯化方法获得高纯度的PBGD融合蛋白.结果 PCR扩增出大小约1 500 bp的特异PBGD cDNA片段;成功构建了pET28a(+)-PBGD融合表达载体;该表达载体融合表达的蛋白分子量约为44 kD,且大部分纯化蛋白存在于包涵体中.胆色素原脱氨酶的酶活性检测中发现,PBGD的最适酶反应温度为36℃,最适酶反应pH为7.5.结论 该实验已成功地克隆出编码正确的PBGD基因片段,并构建了高效原核融合表达载体:pET28a(+)-PBGD.获得PBGD在大肠杆菌中表达的重组蛋白,并纯化至均一,为PBGD结构和功能的研究提供基础.
作者：王君；郭峰；张海峰；张明昱；李存保；王美玲
来源：中国现代医学杂志 2014 年 24卷 32期
