目的 构建小鼠11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)基因的慢病毒真核表达载体PLJM1-11β-HSD1-GFP,建立小鼠前体脂肪细胞(3T3-L1)高表达11β-HSD1基因的稳定感染细胞株,为11β-HSD1基因的功能研究奠定基础.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从小鼠肝脏cDNA中扩增11β-HSD1开放阅读框ORF,构建针对11β-HSD1基因的真核表达载体,转化感受态DH5α菌株,抽提质粒并进行测序鉴定.用测序成功的质粒和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞,产生慢病毒并转染3T3-L1细胞.根据绿色荧光效率挑取单克隆细胞团筛选出稳定细胞株,通过Western blot鉴定PLJM1-11β-HSD1-GFP转染成功.结果 经酶切、PCR及测序验证,PLJM1-11β-HSD1-GFP真核表达载体构建成功,并包装慢病毒,绿色荧光效率90
作者：辛婧；叶磊；杨可；沈亚非；邓飞
来源：中国现代医学杂志 2017 年 27卷 16期
