目的：克隆、表达日本血吸虫高速泳动家族B1蛋白（SjHMGB1），并研究其功能特性。方法利用逆转录PCR （RT-PCR）技术从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增出编码SjHMGB1的完整开放阅读框DNA片段，然后将其亚克隆至原核表达载体质粒pET28a（+）中，构建重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。将重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），含重组质粒的转化子细菌经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导以表达重组SjHMGB1蛋白。通过镍螯合琼脂糖亲和胶亲和层析法制备纯化的重组SjHMGB1蛋白。通过DNA迟滞实验和动物免疫鉴定重组SjHMGB1的DNA结合和免疫学特性。通过免疫印迹试验（Western blotting）和RT-PCR确定SjHMGB1分子在日本血吸虫不同发育阶段的表达情况。以重组SjH-MGB1为抗原免疫小鼠，3次免疫后每只小鼠感染45±2条血吸虫尾蚴，42 d后剖杀，计算减虫率与减卵率，观察其诱导抗血吸虫感染的免疫保护性作用。结果采用RT-PCR法从日本血吸虫成虫mRNA中反转录扩增到长度约为530 bp的特异性DNA条带，序列分析证实为编码SjHMGB1蛋白的开放阅读框序列。将此片段亚克隆至表达质粒pET28a（+）中，成功构建了重组表达质粒SjHMGB1-pET28a。含重组表达质粒SjHMGB1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导能表达分子量约28 kDa的可溶性SjHMGB1
作者：姚媛；余传信；宋丽君；殷旭仁；王玠；金一；沈双；张伟；高玒；许永良；杨静
来源：中国血吸虫病防治杂志 2014 年 2期
