目的 构建并观察靶向β-连环蛋白(β-catenin)的shRNA慢病毒对儿童髓母细胞瘤(MB)细胞株生物学行为的影响.方法 ①设计靶向β-catenin的shRNA 1、2、3和阴性对照(NC),分别插入pCH-CMV-MCS-EF1-copGFP质粒中,通过慢病毒包装后获得相应的重组慢病毒.②培养儿童MB细胞株DOAY并分为Lentivirus(LV)-shRNA 1、2、3、NC组和空白对照组(Blank),前4组感染相应的重组慢病毒,Blank组未感染病毒,感染72 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,通过RT-PCR和Western Blot检测各组细胞中β-catenin的表达情况,选取对β-catenin抑制效果最佳的LV-shRNA,用嘌呤霉素分别筛选稳定感染该LV-shRNA和LV-NC的DOAY细胞系.③设3组,LV-shRNA组和LV-NC组为筛选得到的稳定感染的细胞系,Blank组为未感染病毒的细胞,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 ①LV-shRNA 1、2、3组β-catenin的mRNA和蛋白表达均低于LV-NC组和Blank组,LV-shRNA 1组低于LV-shRNA 2、3组,差异均有统计学意义(P<0.05),以4μg·mL-1嘌呤霉素筛选得到稳定表达LV-shRNA 1和LV-NC的DOAY细胞株.②与LV-NC和Blank组比较,LV-shRNA 1组MTT实验第12、24、36、48、72 h时的OD值较

作者：万江；张海燕；刘义红；李新涛；涂胜英；吴丽敏

来源：中国循证儿科杂志 2017 年 12卷 6期